Efficacy and limitations of different approaches to anticipate the diagnosis of pregnancy in cattle / Eficácia e limitações de diferentes abordagens para antecipar o diagnóstico de gestação em bovinos

The study evaluated sonographic and serologic exams performed for early (20 to 30d) diagnosis of pregnancy. One hundred-twenty (n= 120) bovine recipients were synchronized (estrous=D0) and timed embryo transferred (TET, D7) with fresh in vitro produced embryos. In the first trial (n= 46), diagnosis of pregnancy was performed on day 20 (D20) by detecting CL blood flow (BF) and by Pregnancy-Associated Glycoproteins (PAGs) serology. In the second trial (n= 30), pregnancy diagnosis was performed on D25 by ultrasound visualization of uterine contents and by PAGs serology. In the last trial, PAG's serology was performed on D30. Ultrasonographic detection of the uterine contents and embryo viability performed on D30 (DG30) was considered the gold standard. The PROC FREQ procedure was used to test the agreement between diagnostic methods. On D20, the Doppler ultrasonography of the CL had showed high sensitivity (100%), but only moderate specificity (53.3%). On the same day, serologic diagnostic had no agreement (k= -0.08, P< 0.46) with the gold standard, with very low sensitivity (6.3%). However, the sensitivity of the serologic exam increased dramatically (from 6.3 to 100%) from D20 to D25, and it contributed to detect false negatives from the ultrasound diagnosis, improving the overall accuracy from 90% to 96.7%.(AU)

O estudo foi planejado para correlacionar exames ultrassonográficos e sorológicos realizados para o diagnóstico precoce (20 a 30d) de gestação. Cento e vinte (n= 120) receptoras bovinas foram sincronizadas (estro=D0), e embriões frescos produzidos in vitro foram transferidos em tempo fixo (TETF, D7). No experimento 1 (n= 46), o diagnóstico de gestação foi realizado no D20, pela detecção do fluxo sanguíneo do CL e pela sorologia de glicoproteínas associadas à gestação (PAGs). No experimento 2 (n= 30), a detecção da gestação foi realizada por meio da visualização do conteúdo do útero e também pela sorologia para PAGs. No experimento 3, a sorologia para PAGs foi realizada no D30. Em todos os experimentos, a visualização ultrassonográfica da vesícula e da viabilidade embrionária, realizada no D30, foi considerada padrão-ouro. O procedimento PROC FREQ testou o nível de concordância dos métodos diagnósticos. No D20, o diagnóstico baseado na vascularização do CL mostrou alta sensibilidade (100%) e apenas moderada especificidade (53,3%). Nesse mesmo dia, o diagnóstico sorológico não apresentou concordância (k=-0,08, P<0,46) com o padrão-ouro, além de baixa sensibilidade (6,3%). No entanto, a sensibilidade do exame sorológico aumentou drasticamente (6,3 para 100%) do D20 para o D25, contribuindo para detectar falsos negativos diagnosticados pela ultrassonografia, melhorando a acurácia (90 para 96,7%).(AU)

Teofilina como agente capacitante do sêmen bovino / Theophylline as a capacitating agent of bovine semen

Objetivou-se avaliar a teofilina como agente capacitante substituto ou associado à heparina sobre a reação acrossômica dos espermatozoides e o desenvolvimento de embriões produzidos in vitro. O experimento foi realizado com quatro touros e três tratamentos, totalizando 12 grupos experimentais. O sêmen dos touros foi avaliado nos tratamentos descritos a seguir: tratamento 1 (HEP): heparina - 10µg/mL; tratamento 2 (TEO): teofilina - 5mM; tratamento 3 (HEP + TEO): heparina (10µg/mL) + teofilina (5mM), por zero, seis, 12 e 18 horas, corados com trypan blue/Giemsa para avaliação da reação acrossômica. Para a produção dos embriões, os agentes capacitantes foram adicionados aos meios de fertilização. Na análise espermática, a taxa de reação acrossômica verdadeira foi maior (P<0,05) no tempo zero hora, enquanto para espermatozoides mortos, as maiores taxas (P<0,05) foram nos tempos de 12h (84,46±5,82) e 18h (86,75±4,19). A taxa de embriões produzidos (37,97±13) e a taxa de eclosão (33,50±14) foram maiores (P<0,05) para o tratamento HEP. Não foi observada diferença (P>0,05) entre touros na análise de reação acrossômica nem na PIVE. A utilização da teofilina foi tão eficiente quanto a da heparina na indução da reação acrossômica, no entanto resultou em menores taxas de produção embrionária.(AU)

The sperm capacitating process should take special attention during in vitro embryo production (IVEP) once that affects the success of embryo production. The study aimed to evaluate theophylline as substitute capacitating agent or in combination with heparin on the sperm acrosome reaction and development of embryos produced in vitro. The experiment was carried out using 4 bulls and 3 treatments, establishing 12 experimental groups. Each bull was evaluated in the following treatments: Treatment 1 (HEP): Heparin - 10mg/mL; Treatment 2 (THEO): Theophylline - 5mM; Treatment 3 (HEP + THEO), Heparin (10mg/mL) + Theophylline (5mM). The semen of bulls was incubated in each treatment for 0, 6, 12 and 18h, stained with Trypan blue / Giemsa and analyzed by electron microscopy for assessment of acrosome reaction. Using sperm of same bulls, capacitating agents were added to the fertilization media, for IVEP. In sperm analysis, the true acrosome reaction rate was higher (P<0.05) in time 0h, while sperm dead rates were highest (P<0.05) at 12h (84.46±5, 82), and 18h (86.75±4.19). The produced embryos rate (37.97±13) and hatching rate (33.50±14) were larger (P<0.05) for HEP treatment. There was no difference (P>0.05) between bulls in acrosome reaction analysis neither for IVEP. The use of theophylline was as effective as heparin in the induction of the acrosome reaction, although it resulted in lower embryo production rates.(AU)

Redução da resposta superovulatória de fêmeas bovinas superestimuladas com FSH em doses split / Reduced superovulatory response of bovine females overstimulated with FSH in split doses

Objetivou-se avaliar a superovulação (SOV) de vacas zebuínas, utilizando protocolo convencional ou protocolo com número menor de aplicações e similar dosagem (dose split). Utilizaram-se 16 fêmeas (total 32 SOV), com idade entre 17-42 meses e escore de condição corporal 2,5-4 (escala de 1-5), em delineamento tipo cross-over. No início do tratamento (D0), os animais receberam um dispositivo de progesterona e 2mg de benzoato de estradiol. As fêmeas do grupo convencional receberam 250UI de FSH/LH divididas em oito doses decrescentes administradas em intervalos de 12h (FSH/LH no D4, D5, D6 e D7 no período da manhã e tarde, nas respectivas dosagens: 50,0 UI; 37,5 UI; 25,0 UI; 12,5 UI). No D7 pela manhã, as fêmeas foram tratadas com 150μg de D+cloprostenol, e a remoção da progesterona foi realizada no D7 à tarde. As fêmeas do grupo split também receberam 250 UI de FSH/LH. No D4 de manhã, administraram-se 62,5 UI de FSH/LH via IM e 125 UI por via SC. Quarenta e oito horas após (D6) administraram-se 62,5 UI via SC e na manhã do D7 foi removida a progesterona e aplicaram-se 150μg de D+cloprostenol. As fêmeas de ambos os grupos receberam 50μg de análogo de GnRH no D8 pela manhã e foram inseminadas 12 e 24 horas após. No D15 realizou-se a colheita dos embriões em ambos os tratamentos. Avaliou-se a resposta superovulatória pela contagem do número de folículos e CLs de cada ovário, com auxílio de ultrassom. Todas as variáveis foram submetidas ao teste T de Student para amostras pareadas. Houve diferença (P<0,05) na quantidade de folículos acima de 8mm no D8 (9,06±4,54 e 5,50±4,59); número de CLs no dia da colheita (8,12± 3,26 e 4,69±3,46), número de embriões totais (6,69±3,05 e 3,37±2,50) e de embriões viáveis (5,25±2,29 e 2,37±1,78) nas vacas do grupo convencional em relação às do split, respectivamente. Conclui-se que o protocolo split tem pior resposta superovulatória e de produção in vivo de embriões, em vacas zebuínas, quando comparado ao protocolo convencional...

The aim of this study was to evaluate the superovulation (SOV) response of zebu cows, using conventional protocol or other protocol with similar dose but smaller number of applications (split dose). 16 females (32 SOV), aged 17-42 months, and body condition score of 2.5-4 (1-5 scale) were used in randomized cross-over. At the start of treatment (D0), the animals received progesterone device and 2mg of estradiol benzoate. The females from the conventional group received 250 IU of FSH/LH divided into eight decreasing doses administered at intervals of 12 hours (FSH/LH in D4, D5, D6 and D7, with their respective strengths: 50.0 IU, 37.5 IU, 25.0 IU, 12.5 IU). In D7, the females were treated with 150μg of D+cloprostenol, and the removal of progesterone device was held in the afternoon. The females from the split group also received 250 IU of FSH/LH. In the morning D4 was administered in 62.5 IU FSH/LH IM and 125 IU subcutaneously. Forty eight hours later (D6) 62.5 IU was administered subcutaneously in the morning and on D7, the progesterone device was removed and 150 μg of D+cloprostenol was applied. The females in both groups were given 50 μg of GnRH in the morning and on D8 were inseminated after 12 and 24 hours. On D15 the embryo collection was performed in both treatments. The evaluation of superovulatory response was done by counting the number of follicles and corpus luteum (CL) in each ovary, with the aid of ultrasound. The variables were assessed by Student's t test for paired samples...

Inseminação artificial em tempo fixo em primíparas Nelore lactantes acíclicas / Fixed-time artificial insemination in primiparous lactating Nelore acyclic cows

Avaliou-se a eficiência de um protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF), para melhorar o desempenho reprodutivo de vacas Nelore primíparas, lactantes e acíclicas. Utilizaram-se 350 vacas com escore de condição corporal médio de 2,65±0,01 e média de dias pós-parto de 67,35±1,0 dias. A estação de monta (EM) foi de 180 dias. Os animais foram distribuídos em: G1(n=61) e G3(n=116) - vacas com presença de folículos ovarianos ≤8mm de diâmetro e sem corpo lúteo (CL); G2(n=57) e G4(n=116) - vacas com folículos ≥8mm e sem CL. As vacas do G1 e do G2 permaneceram em monta natural (MN) a partir do dia zero da EM. G3 e G4 foram tratados (dia zero) com 2mg de benzoato de estradiol (BE), IM, e dispositivo com 1,0g de P4 por oito dias. Retirou-se a P4, administraram-se 400UI de eCG e 75µg de cloprostenol, IM, 24h após, e 1mg BE, IM. A IATF foi realizada 51-54h após retirar P4. Aos cinco dias após término da IATF, as vacas do G3 e do G4 também foram mantidas em MN. Avaliou-se, por ultrassonografia, a presença de CL e realizou-se o diagnóstico de gestação, aos 45 e 210 dias após início da EM. Aos 45 dias, mais animais do G3, 42,2%, e do G4, 51,7%, estavam gestantes (P<0,05), em relação aos do G1, 0%, e do G2, 3,5%. A porcentagem de CL foi de 6,6%; 28,1%; 50,9%; 62,9% em G1, G2, G3 e G4, respectivamente. Aos 210 dias, 22,9% do G1; 45,6% do G2; 40,5% do G3 e 65,5% do G4 estavam gestantes. Os períodos de serviço foram: em G1, 134,00±11,70 dias; em G2, 119,65±8,27 dias; em G3, 79,91±5,38 dias; e em G4, 81,40±4,59 dias. A IATF foi eficiente para melhorar o desempenho reprodutivo de vacas Nelore primíparas lactantes acíclicas em relação ao manejo apenas da MN.

The aim of this experiment was to evaluate the efficiency of a fixed-time artificial insemination protocol to improve the reproductive performance of lactating primiparous acyclic Nelore cows. A total of 350 cows with average body condition score of 2.65±0.01 and average postpartum days of 67.35±1.0 were used. The breeding season (MS) was 180 days. The animals were distributed into G1 (n = 61) and G3 (n = 116) - cows with ovarian follicles ≤8mm in diameter and without corpus luteum (CL). G2 (n = 57) and G4 (n = 116) groups - cows with follicles ≥8mm and without CL. Cows in G1 and G2 remained in natural mating (NM) from day 0 of MS. G3 and G4 were treated (Day 0) with 2mg of oestradiol benzoate (EB), IM, and 1.0g P4 device for eight days. The withdrawal of P4 was administered with 400IU of eCG and cloprostenol 75μg, IM, after 24h, and 1mg BE, IM. The artificial insemination was performed at 51-54h after removing the P4 device. Five days after the end of the artificial insemination, cows from G3 and G4 were also held in MN. Ultrasonography was performed to evaluate the presence of CL and the pregnancy diagnosis at days 45 and 210 after the onset of MS. At 45 days more animals in G3, 42.2% and G4, 51.7% were pregnant (P <0.05) than in G1, 0% and G2, 3.5%. The CL percentage was 6.6%, 28.1%, 50.9%, 62.9% in G1, G2, G3 and G4, respectively. At 210 days 22.9% in G1, 45.6% in G2, 40.5% in G3 and 65.5% in G4 were pregnant. The service periods were: G1, 134.00±11.70 days; G2, 119.65±8.27 days, in G3, 79.91±5.38 days, and G4, 81.40±4.59 days. The fixed-time artificial insemination was efficient to improve the reproductive performance of primiparous lactating Nelore acyclic cows compared to animals that remained only with natural mating.

Angioarquitetura venosa do órgão genital da fêmea bovina / Venous angioarchitecture of the bovine female genital organ

Investigou-se a angioarquitetura venosa da genitália de fêmeas bovinas não prenhes, para avaliar a presença de possíveis anastomoses dos vasos provenientes da região da vulva e da vagina com a veia útero-ovariana, usando-se cinco peças obtidas em abatedouros. No laboratório, um ramo da veia vaginal caudal, infundido com contraste radiográfico intravascular, foi submetido à radiografia; Observou-se que a veia vaginal forma intensa rede de anastomoses na superfície ventral do útero, entre os antímeros direito e esquerdo. As genitálias apresentaram anastomoses dos vasos vulvares e vaginais com vasos da cérvice, corpo e cornos uterinos, sugerindo que parte de um agente luteolítico administrado via intravulvosubmucosa pode ser transportado diretamente aos ovários por uma rota local, sem atingir a circulação sistêmica.

Dinâmica folicular e momento da ovulação em vacas não lactantes das raças Gir e Nelore durante duas estações do ano / Follicular dynamic and ovulation time of non-lactating Gir and Nelore cows during two seasons of the year

Estudou-se o efeito da estação do ano na dinâmica folicular e no momento de ovulação utilizando-se 25 vacas não lactantes da raça Gir (10 no inverno e 15 no verão) e 15 vacas não lactantes da raça Nelore (sete no inverno e oito no verão), todas com ciclo estral normal. Após a detecção do estro, as vacas foram submetidas a exames ultra-sonográficos a cada seis horas com a finalidade de monitorar o momento de ovulação e, posteriormente, uma vez ao dia durante todo o ciclo estral, sendo monitorado um ciclo estral por animal e por estação do ano. As características foliculares não foram afetadas pela estação do ano e não diferiram entre as raças. Houve maior percentagem de ciclos com três (68,0 e 66,7 por cento) e duas ondas foliculares (24,0 e 26,7 por cento) nas raças Gir e Nelore, respectivamente. Os intervalos entre estros e entre ovulações foram menores para ciclos com duas ondas foliculares. A manifestação do estro ocorreu mais nas primeiras horas da manhã (57,3 por cento) e no final da tarde e início da noite (28,0 por cento). O momento de ovulação ocorreu 23,1±5,6 horas após a detecção do estro nas duas raças.